<< Предыдушая Следующая >>

ПЦР-ММК – метод ранней диагностики раковых клеток

Из первой раковой клетки за счет ее деления вначале в ткани образуется узелок в 1-2 мм в диаметре. Но уже с этого размера раковые клетки индуциру- ют внутри узелка ангиогенез и лимфангиогенез. С началом оттока крови и лимфы из узелка раковые клетки отделяются от него и с кровью и лимфой раз- носятся по организму пациента – рак становится болезнью всего организма па- циента.

Из этого следует, что диагностика рака, любого размера, видимого глазом и с помощью приборов – это поздняя диагностика. Пока в практике врача- онколога диагностика рака тогда, когда рак проявляет себя симптомами.

Ученые разных стран и нашей страны разными методами стремятся перейти к диагностике рака задолго до его симптомов. Именно на таком этапе болезни, можно надеяться на излечение от рака.

Нормальная клетка превращается в раковую после воздействия на нее какого-либо канцерогена. Это вызывает в ней изменения экспрессии генов, создающих ее свойства. Вторая причина – изменения экспрессии генов- супрессоров в этой клетке метилированием их промотора, а также мутации. Эти изменения происходят в генах, регулирующих процесс деления клетки, в генах, ингибирующих деление клетки при нарушениях в ее геноме, а также в генах, вызывающих апоптоз в таких клетках.

Каждый дефект в геноме раковой клетки является маркером такой клетки. Термин маркер (от англ. mark – метка). Диагностика первой раковой клетки и ее близких потомков по генам-маркерам – это ранняя диагностика рака у пациента.

Но как найти в организме пациента раковую клетку и ее потомки от первых делений среди 5 1013-14 клеток организма взрослого человека.

Как и любая клетка, раковая клетка микроскопического размера, возникнув в ткани, ничем не беспокоит пациента. За счет свойства к инвазии ее потомки распространяются в окружающие здоровые ткани и по всему организму, где, оседая, дают новые очаги рака – метастазы.

Задача диагностики разрозненных раковых клеток в тканях различных органов сопоставима даже не с поиском иголки в стоге сена, а с поиском конкретного пучка сена в этом стоге. Поэтому не нужно быть слишком большим пессимистом, чтобы предположить всю «тупиковость» такой ситуации в практике врача-онколога.

Но все изменил метод ПЦР, т.е. полимеразная цепная реакция, а в сочетании с ММК – методом молекулярных колоний, разработанным нашими учеными – чл.-корр. А.Б. Четвериным и Е.В. Четвериной (2002), стал для ранней диагностики весьма точным.

При любой локализации рака в кровь пациента попадают: а) сами раковые клетки – из стенок мозаичных капилляров узелка из раковых клеток в 1-2 мм в диаметре и б) гены-маркеры из погибших раковых клеток еще задолго до проявления как первичного очага рака, так и его метастазов. Это и позволяет выявлять рак у пациента с самого начала, т.е. с размера узелка в 1-2 мм в диаметре.

Еще в 60-70-х гг. XX в. Ф. Анкер (Ph. Anker) из Швейцарии сделал первые попытки доказать возможность обнаружения дефектных генов из раковых клеток в крови от пациента.

Наш ученый, проф. А.С. Белохвостов еще в 1960 г. XX в. обнаружил дефектные гены из раковых клеток яичника и желудка в асцитной жидкости. Он же с коллегами в 1978 г. XX в. доказал выход дефектных генов из раковых клеток в кровоток из опухолей в эксперименте на животных.

Теперь дефектные гены из раковых клеток обнаруживают с помощью ПЦР, а также ПЦР-ММК не только в крови, но и в других выделениях от пациента – слюна, слезная жидкость, слизь, мокрота, моча и др., в зависимости от типа раковой клетки.

Раковые клетки разрушаются в тканях за счет апоптоза как клетки с дефектами в геноме, а также при уничтожении Т-клетками. ДНК из них попадает в межклеточную жидкость, а из нее в кровь. В кровь попадают раковые клетки из первичного очага рака и метастазов. В крови они разрушаются, в том числе Т-клетками.

Молекулы ДНК и иРНК не могут быть вне клетки, в частности, раковой клетки, а раковая клетка не может быть без ДНК и иРНК. Поэтому выявление этих молекул является эквивалентом обнаружения их носителя – раковой клетки.

Точно также по молекулам ДНК, РНК диагностируют бактерии и вирусы – возбудителей различных инфекций у пациентов.

Выявление генов-маркеров раковых клеток в их ДНК является идеальным методом для ранней диагностики раковых клеток, контроля лечения и излечения, а также предсказания и диагностики рецидива и метастаза рака у пациентов.

ПЦР-диагностика раковых клеток по плазме крови

Процесс, благодаря которому можно получать копии генов из ДНК в неограниченном количестве, называют полимеразной цепной реакцией – ПЦР.

ПЦР открыл в 1983 г. американский ученый К. Мюллис (Kary B. Mullis), за что он был удостоен Нобелевской премии.

Мишенями ПЦР являются – фрагмент ДНК с находящимся в нем геном и иРНК – копия гена.

Цель ПЦР – размножить фрагмент ДНК из образца плазмы крови пациента, т.е. получить его копии, а также размножить иРНК до уровня, детектиру- емого стандартными методами. Чтобы размножить иРНК, ее сначала нужно с помощью обратной транскриптазы перевести в комплементарную ей ДНК, т.е. кДНК.

Таким методом можно обнаружить экспрессию гена или генов по уровню их мРНК, а также мутации в гене, что явилось причиной превращения нормальной клетки в раковую.

Принцип ПЦР

Для ПЦР-метода из клинического образца – плазмы крови выделяют смесь всех содержащихся там ДНК и РНК. Далее, чтобы понять принцип копирования этих молекул, нам не обойтись без некоторых знаний об их природе.

Молекула ДНК состоит из двух цепей, построенных из нуклеотидов, основной частью которых являются азотистые основания: аденин – А, цитозин – Ц, гуанин – Г и тимин – Т. Азотистые основания несут в себе генетическую информацию о структуре белков, а через них – строение клетки и ее функции, а также ее воспроизведение, т.е. деление на две дочерние клетки.

В английском языке есть слово ?complement? – дополнять, дополнение. От него в молекулярной биологии появился термин – комплементарность. Смысл его в том, что молекулы узнают друг друга участками, которые дополняют друг друга как «ключ и замок».

По этому принципу цепи нуклеотидов составляют комплементарную пару: А одной цепи всегда против Т другой цепи, а Г против Ц. Когда А и Т в двух цепях ДНК расположены друг против друга, между ними образуются две водородные связи. То же происходит с Г и Ц, но между ними возникает три водородные связи.

Из комплементарности пар оснований следует, что последовательность или порядок размещения азотистых оснований на одной цепи ДНК, определяет порядок азотистых оснований в ее другой цепи. Концы цепей ДНК химически различны: у каждой цепи есть 3’-конец и 5’- конец (Рис. 1, 2, 3).

Рис 1.

Фрагмент молекулы ДНК

.

Цепь ДНК, которая служит матрицей для синтеза матричной РНК называется матричной цепью.

Рис. 2.

Цепь мРНК – это копия матричной цепи ДНК

, последовательность азотистых оснований в ней та же, что и в нематричной цепи ДНК, но с заменой Т на У.

Цепь мРНК с помощью ПЦР размножают, но сначала ее с помощью обратной транскриптазы переводят в комплементарную ей матричную цепь ДНК – кДНК.

Рис. 3

. кДНК синтезирована на матрице мРНК – копии гена

.

Образование водородных связей между парами оснований: А-Т и Г-Ц – это спонтанный процесс, т.е. без участия фермента. Эти связи слабые и легко рвутся при нагревании – цепи ДНК отделяются друг от друга, а при охлаждении раствора – вновь спариваются в прежнее комплементарное состояние. Спонтанный процесс образования пар оснований А-Т и Г-Ц называют гибридизацией.

В основе ПЦР-анализа и лежит гибридизация пар оснований, как спонтанный процесс.

Выделенные из образца плазмы крови ДНК и иРНК являются мишенями для ПЦР. Их смешивают с реакционным буфером и другими компонентами ПЦР в специальную пробирку и помещают в прибор – ДНК-амплификатор, дающий циклические изменения температуры реакции.

Цикл ПЦР для размножения молекул-мишеней – ДНК и иРНК состоит из трех стадий:

1) расплавление двухцепочечной ДНК путем повышения температуры реакционной среды до 90° С;

2) зная порядок оснований на концах фрагмента ДНК, взятого для размножения, т.е. амплификации, синтезируют химическим путем олигонуклеотиды, комплементарные этим участкам – это праймеры;

3) присоединение праймеров к матрицам, т.е. к однотяжевым цепям ДНК, полученными в результате первой стадии. Температура реакционной среды – 50-60°С.

На этой стадии происходит удлинение, т.е. элонгация гибридизованных праймеров ДНК-полимеразой при температуре для работы фермента 70-75°С, что превращает каждую из цепей в двухцепочечную молекулу ДНК (Рис. 4).

Рис. 4.

Схема ПЦР

[рис. и цит. по: А.С. Белохвостов (1995) с изменения- ми]. На схеме цикл удвоения молекулы ДНК из исследуемого образца:

а – цепи исходной молекулы ДНК изображены двумя прямыми линиями;

б – после разделения цепей ДНК, к их концам присоединены по одному комплементарному праймеру в виде прямоугольника;

в – идет синтез новых цепочек ДНК.

ПЦР.

Примечание. Стрелками показано направление синтеза новых цепей в

По окончании одного первого цикла из одной молекулы двухцепочечной ДНК получены две, в следующем цикле каждая из двух молекул снова удваивается и так далее, с нарастанием числа молекул (N) по формуле: N = 2n, где n – число циклов. Отсюда и название реакции – цепная.

Теоретически ПЦР позволяет размножить до легко детектируемых количеств даже единственною молекулу-мишень ДНК, даже если она находится среди множества других молекул ДНК и РНК. Стандартная ПЦР постоянно совершенствуется.

Продукты ПЦР – молекулы ДНК, а значит гены и иРНК подвергаются анализу рядом методов, например электрофорезом в геле с окраской молекулы ДНК бромидом этидия и др. Определяются ген(-ы) и мутации в них: замена – пара оснований меняется на другую; вставка – в молекулу введена новая пара оснований; делеция – отсутствие пары комплементарных оснований в гене. По количеству копий иРНК гена судят о степени его экспрессии в клетке.

Различают два варианта ПЦР-диагностики: 1) качественный тест и 2) количественный тест.

Для качественного теста требуется лишь дать ответ: «да» или «нет», т.е. содержится ли в образце ДНК или иРНК. Для диагностики вирусной инфекции обычно достаточен факт обнаружения в образце вирусной ДНК или иРНК.

Для обнаружения раковой клетки в образце недостаточно, например, обнаружить иРНК, так как она может быть продуктом и нормальной, и раковой клетки.

Количественный тест определяет титр, т.е. число копий молекул- мишеней в определенном количестве образца, здесь крайне важны мишени – ДНК и иРНК.

Ведь для ранней диагностики рака крайне важно обнаружить его на самом раннем этапе – на уровне первой раковой клетки и ее первых потомков, а еще лучше на уровне предраковой клетки по генетическим маркерам в молекулах-мишенях – ДНК и иРНК. На уровне одной из этих клеток титр мишени будет минимальным.

Титр мишеней – ДНК и иРНК и их генетические маркеры необходимы:

1) для исследования молекулярных причин превращения нормальной клетки в раковую клетку в конкретном случае;

2) для слежения за течением скрытого еще рака на уровне первой раковой клетки и ее первых потомков, но также и для рака с симптомами;

3) для оценки эффективности лечения рака, коррекции лечения рака в процессе его лечения по состоянию генетических маркеров раковых клеток.

Чувствительность стандартной ПЦР разные авторы оценивают по- разному; причиной этого может быть и степень чувствительности ее в специфическом обнаружении молекул-мишеней, но и характер клинического образца – плазма крови, ткань опухоли, слюна, моча и другие различные выделения.

ПЦР-ММК-метод для ранней диагностики раковой клетки или клеток по плазме крови

Стандартная ПЦР может давать сбои и ошибки, в результате чего: 1) молекулы-мишени не будут выявлены из-за потери их в процессе подготовки образца;

2) молекулы-мишени могут быть не размножены в процессе ПЦР, тем более что в обычной клинической практике молекулы-мишени представляют незначительную долю среди ненужных матриц в образце.

Чл.-корр. А.Б. Четверин и Е.В. Четверина – сотрудники Института белка РАН – открыли метод молекулярных колоний – ММК, для прямого определения титра молекулы-мишени и пространственное разделение размножения нужных молекул-мишеней от ненужных.
Этот метод запатентован учеными в РФ и в США (1995, 1998).

Принцип метода в том, что молекулы-мишени – ДНК и иРНК – размножаются не в жидкости, а в геле. Это создает отдельные колонии, каждая из которых является потомством единственной молекулы, т.е. клон.

ММК может сочетаться с ПЦР для размножения молекул-мишеней. Сначала гель полимеризуют, затем вымачивают в воде, чтобы удалить все растворимые вещества, затем автоклавируют и сушат.

Перед началом ПЦР гель пропитывают реакционной смесью. Этим авторы достигают полного сохранения активности ДНК-полимеразы и уничтожения молекул ДНК из окружающей среды, которые могли бы попасть в гель при его приготовлении. Синтез кДНК на молекуле иРНК может быть осуществлен отдельно или в геле. Для детекции мишеней используется универсальная реакционная смесь с ДНК-полимеразой (Рис. 5).

Рис. 5.

Схема проведения ПЦР-ММК

(рис. и цит. по: А.Б. Четверин, Е.В. Четверина, 2002).

1. а – лунка с высушенным полиакриламидным гелем;

2. б – пропитывание геля реакционным раствором, содержащим, в том числе, исследуемый образец и специфические праймеры;

3. в – инкубация геля в течение 30 мин при 55-65° С – условия обратной транскрипции, с последующими 40 циклами ПЦР;

4. г – промакивание геля нейлоновой мембраной – перенос колоний;

5. д – гибридизация мембраны с радиоактивно меченым зондом, специфичным к искомой мишени; получение радиоавтографа мембраны.

Как пишут авторы метода, «ММК позволяет преодолеть все проблемы стандартной ПЦР и впервые сделать ПЦР-диагностику действительно чувствительной, количественной и надежной» (2003).

Основные отличия ПЦР-ММК от стандартной ПЦР

1) Реакционную смесь для размножения мишеней – ДНК и РНК, вносят не в жидкость в специальной пробирке, а в лунку с пленкой высушенного полиакриламидного геля. В результате чего «потомство каждой молекулы образует колонию, а не распространяется по реакционному объему».

2) Каждая колония является клоном молекул, а число колоний прямо указывает «на число молекул ДНК или РНК, присутствующих в геле до начала реакции».

3) ПЦР-ММК фактически дешевле стандартной ПЦР: а) «многократно» сокращает число проб для проведения анализа; б) расход реактивов «почти ткой же»: объем геля – 65 мкл, в стандартной ПЦР объем реакционной смеси 50 мкл.

Для выполнения ПЦР-метода, а тем более ПЦР-ММК пригодны любая ткань, биологическая жидкость и выделения человека. По генным маркерам эти методы позволяют выявлять минимальное число раковых клеток при раке крови и лимфатической системы, так и при солидном раке. Это крайне важно для ранней диагностики раковых клеток первичного очага рака или метастазов, а также для выявления остатков раковых клеток после лечения рецидива рака.

Плазма крови от пациента является универсальным источником генных маркеров из раковых клеток любого типа клетки, т.е. любой локализации рака у пациента.

Повышение содержания генов-маркеров из раковых клеток в плазме крови при раке установлено многими исследователями.

Проф. Д. Сидрански (1994) считает, что ПЦР позволила совершить «генетическую революцию в ранней диагностике рака», подчеркивая следующее:

- рак начинается из одной клетки, утратившей зависимость деления от защитных механизмов организма;

- в такой клетке возникают изменения генов, что вызывает бесконтрольное ее деление с образованием из нее клона клеток – рак;

- особенность лечения человека от рака в том, что эффект лечения возможен лишь до образования его метастазов;

- рак опасен из-за того, что отдельные его клетки отрываются от клона и, продолжая делиться, проникают в окружающие здоровые ткани, а другие образуют метастазы в отдаленных органах. Это причина гибели людей от рака;

- ПЦР позволяет в биологических жидкостях от больного выявлять самые начальные изменения в структуре ДНК клеток, а в сущности предрак;

- с помощью ПЦР удается в жидкостях обнаружить даже одну дефектную или мутантную молекулу ДНК из раковых клеток среди многих других молекул в исследуемой жидкости; чувствительность этого метода до 100%.

- ПЦР – это универсальный метод для ранней диагностики раковых клеток любой локализации рака у пациента. Им можно выявить тех лиц, которых необходимо обследовать детально.

Проф. А.С. Белохвостов (2000) впервые в двух работах изложил основы ранней диагностике раковых клеток с помощью ПЦР-метода; мы излагаем их кратко:

1) бессимптомный рост рака от одной клетки до очага в 2 мм в ткани продолжается долгие годы или даже десятилетия;

2) такой очаг из раковых клеток до 2 мм в диаметре дремлет в тканях до тех пор, пока не произойдут изменения в генах его клеток, вызывающих ангиогенез и лимфангиогенез. С этого момента начинается рост и распространение его клеток через кровь и лимфу по организму пациента – рак становится болезнью всего организма.

3) еще недавно диагностировать рак размером 2 мм, особенно если он находился во внутренних органах, было почти не возможным. И только метод ПЦР позволил определять очень малое число дефектных генов, иногда даже одну молекулу дефектного гена из раковой клетки.

Раковые клетки содержат эпимутации основных свойств и мутации или эпимутации генов-супрессоров. Такие изменения являются генетической меткой, т.е. маркером раковой клетки.

Ген-супрессор белка р53. В норме он сдерживает деление «генетически дефектных клеток и заставляет их запускать апоптоз».

Мутации в этом гене обнаруживаются в половине случаев раковой клетки разного типа; эти поломки в гене «позволяют генетически дефектной клетке избежать апоптоза».

Ген-супрессор белка p16. Он в норме подавляет деление дефектной клетки «в другой точке клеточного цикла», но инактивирован из-за метилирования его промотора почти у половины раковых клеток разного типа.

Ген k-ras – мутантная форма одного из ключевых нормальных генов стимуляторов деления клетки. Есть еще ряд генов с высокой частотой дефектов в раковой клетке. Для ранней диагностики раковой клетки важна регистрация эпимутаций и мутаций в нескольких генах.

ДНК из раковых клеток попадает «в межклеточную жидкость и далее в кровоток» после разрушения раковых клеток в тканях.

В плазме крови у таких пациентов будут, пишет автор, находиться фрагменты ДНК из раковых клеток. Обнаружить их долго не удавалось, пока не появился ПЦР-метод.

По расчетам проф. А.С. Белохвостова и первый его опыт применения этого метода показал возможность диагностировать в любой ткани рак размером с 2-х мм в диаметре.

Автор подчеркивает, что диагностика раковых клеток в организме паци-по их генам-маркерам в плазме крови ПЦР-методом, позволяет осуществлять слежение за эффектом лечения рака. Он рекомендует сроки взятия для этого плазмы крови: до операции, после операции иссечения рака и путей лимфооттока, а также спустя не ранее, чем через 2 недели после лечения, и после химиотерапии.

Если, маркер, например ген белка р53, выявлен в клетках и в плазме до операции и/или после окончания химиотерапии, это означает, что раковых клеток «или совсем не осталось в организме или их незначительная часть находится в покоящемся состоянии». В любом случае, рецидив или метастазы в ближайшие месяцы маловероятны.

«Если же мутантный ген или измененный в экспрессии ген продолжает выявляться в ДНК плазмы крови или его количество нарастает, это указывает на рецидив рака или метастазы. Это требует изменения схемы лечения – добавления или замены химиопрепаратов, средств биотерапии и т.д.». Такие анализы ученый рекомендует выполнить несколько дней, а «значение ответа – ценою в жизнь».

Мы видим, что ученые сконцентрировали свое внимание на поиске в плазме и других биологических жидкостях генов-маркеров из ядер раковых клеток, а это нелегкая задача (В.П. Шелепов и соавт., 1997).

Оказалось, что мутации могут быть и в митохондриях – органеллах, расположенных в цитоплазме клетки и обнаружить их в раковых клетках достаточно просто. Это открытие сделано проф. Д. Сидрански (2000).

Гены, превращающие нормальную клетку в раковую клетку, часто находятся в ядре клетки в виде одной или многих копий. Но, оказалось, что дефекты и изменения могут возникать не только в них, но и в генах митохондрий раковой клетки.

В каждой клетке, в том числе и раковой, имеется несколько сот митохондрий. Митохондрии – это самореплицирующиеся органеллы.

В каждой из них есть своя ДНК, в ней несколько генов, обеспечивающих синтез белков митохондрий. Количество копий такой ДНК может быть от од-до десяти на митохондрию.

Гены ДНК митохондрий в раковых клетках подвергаются «усиленному воздействию токсических продуктов кислорода». Это вызывает «накопление большого числа изменений в генах митохондрий, чем в генах ядра раковой клетки».

В результате мутации ряда генов митохондрий выявляются в более чем половине случаев раковой клетки разного типа.

Другой важной особенностью в раковой клетке является «вытеснение митохондрий с нормальными генами путем преимущественного размножения митохондрий с мутантной ДНК». Это приводит к тому, что «все митохондрии в раковой клетке становятся потомками митохондрий с мутантными генами ее ДНК».

Отсюда: если «в гене, находящемся в ДНК ядра клетки может быть лишь одна или две копии мутантного гена, то в митохондриях одной раковой клетки может находиться от нескольких сотен до десяти тысяч копий мутантного гена митохондриальной ДНК».

Из этого, проф. А.С. Белохвостов (2000) делает вывод: «если раковые клетки обнаруживать по мутантным генам митохондрий в плазме крови и в других биологических средах пациента, чувствительность ПЦР-теста можно увеличивать еще в сотни раз по сравнению с применяемым сейчас методом выявления маркеров измененных генов из ДНК ядра раковой клетки».

Сейчас, пишет проф. А.С. Белохвостов, возможным пределом размера обнаруживаемого рака считается очаг в 2-3 мм в диаметре, то при применении ПЦР для поиска в плазме крови мутантных генов митохондриальной ДНК, из раковых клеток, по-видимому, можно будет определять очаг рака в ткани в 1 мм в диаметре.

В случае успеха такого подхода к оценке генов-маркеров раковых клеток ядерного генеза будут добавлены гены-маркеры из ДНК митохондрий раковых клеток.

О повышении выявляемости раковых клеток автор дает пояснения. Он говорит, что «мутации какого-либо гена раковой клетки, взятого в качестве маркера, встречаются только у части пациентов».

Изменения в экспрессии генов свойств нормальной клетки – главная причина канцерогенеза.

Метилирование CpG-островков в промоторе гена выключает ген, а деметилирование – включает ген. При этом изменений структуры в последовательности оснований гена не происходит. Это обозначают термином – эпимутация, о чем мы уже писали в разделе канцерогенеза.

Метилирование или деметилирование промотора генов – это маркеры раковой клетки. Для анализа статуса метилирования генов раковой клетки часто используют МС-ПЦР – метилспецифическая полимеразная цепная реакция. Материалом для этого является ДНК раковых клеток в образцах плазмы крови и других биологических жидкостей, фрагменты из опухоли от пациента.

Диагностика раковых клеток по их эпигенетическим изменениям в сравнении с нормальной клеткой – это новое направление в ранней диагностике раковых клеток. Оно открывает новые пути для создания новых лекарственных средств и методов лечения от рака.

В целях изучения канцерогенеза и других проблем ученые используя методы – ПЦР-ММК, МС-ПЦР, микрочипы и др. занялись изучением профилей экспрессии «изолированных клеток и клеточных культур».

1. Фенотип стволовой клетки. Цель – знать типичный профиль экспрессии генов в эмбриональных и региональных стволовых клетках. Оказалось, что в этих клетках набор экспрессируемых генов «ограничен». Это важно для понимания явления «стволовости».

2. Сравнение экспрессии генов в эмбриональных стволовых и раковых клетках. Обнаружено, что многие раковые клетки экспрессируют белки-маркеры эмбриональных стволовых клеток. Например, Oct-4, Nanog и hTERT, что указывает на сходство биологии эмбриональных стволовых «и, по крайней мере, части раковых клеток».

3. Сравнение профилей экспрессии региональных стволовых и раковых клеток. Профиль экспрессии некоторых типов раковой клетки сходен с профилем экспрессии региональных стволовых клеток той ткани, из которой возникает раковая клетка, это указывает на то, что «именно региональные стволовые клетки в этих тканях способны претерпевать злокачественное перерождение» (К.Н. Ярыгин, Е.Е. Егоров, И.Б. Чеглаков и соавт., 2006).
<< Предыдушая Следующая >>
= Перейти к содержанию учебника =

ПЦР-ММК – метод ранней диагностики раковых клеток

  1. Методы для ранней диагностики раковых клеток
    Методы для ранней диагностики раковых
  2. Биочип или микроматрица – устройство для ранней диагностики раковых клеток, слежения за лечением рака и контроля излечения
    Биочип – это организованное размещение молекул ДНК или белка на специальном носителе – «платформе». Платформа представляет из себя пластинку площадью всего 1 см2 или чуть больше. Она сделана из стекла или пластика, либо из кремния. На ней в строго определенном порядке может быть размещено множество молекул ДНК или белка. Отсюда и присутствие в термине слова – «микро». На биочипе можно
  3. Участие гемопоэтических клеток костного мозга в процессе мета- стазирования: новые мишени диагностики метастазов раковых клеток и их уничтожения
    Причины, по которым раковые клетки могут покидать первичный очаг рака и мигрировать в другие части тела, до конца не изучены. Многие жизни можно будет спасти, если удастся останавливать этот процесс. До сих пор считалось, что место образования метастаза определяется тем, в какой орган или органы с потоком крови попадает раковая клетка или клетки из первичного очага рака. Из нее за счет деления
  4. Ксеновакцина – метод профилактики возникновения раковых клеток и их уничтожения
    Термин ксеновакцина (от греч. xenos – чужой + вакцина – от лат. vaccinus – коровий) означает препарат, применяемый для профилактики и лечения, в данном случае рака. Для излечения любого типа рака необходимо уничтожение всех раковых клеток в организме пациента. Но достичь этого традиционными методами лечения – хирургия, лучевая терапия и химиотерапия – не удается, так как эти методы неадекватны
  5. ДНК-чип для диагностики раковых клеток первичной опухоли и микрометастазов по плазме крови от пациента
    Так как диссеминация раковых клеток начинается с узелка из этих клеток в 1-2 мм в диаметре, то излечение рака возможно лишь на пути его ранней диагностики. В XXI в. станут известными основные гены-маркеры и белки-маркеры, превращающие нормальную клетку в раковую. По ним будет проводиться ранняя диагностика раковых клеток. Ранняя диагностика рака – это диагностика его начала. Еще важнее
  6. Методы уничтожения раковых клеток
    Методы уничтожения раковых
  7. Протеом клетки – значение для медицины, ранней диагностики раковой клетки и излечения рака
    Скоро нынешняя медицина уйдет в прошлое. Давняя мечта П. Эрлиха – иметь лекарство без нанесения вреда пациенту – «волшебную пулю», станет реальностью. Оно будет уничтожать: при инфекциях – возбудителей, при раке – раковую стволовую клетку, не повреждая здоровых клеток, действуя на белок, вызывающий болезнь. Для каждого пациента будут создаваться индивидуальные лекарства. Это началось после
  8. Белковый чип для диагностики раковых клеток первичной опухоли и микрометастазов по сыворотке крови пациента
    Второй путь ранней диагностики раковых клеток по белкам на поверхности раковых клеток. Раковая клетка отличается от нормальной клетки того же типа по составу синтезируемых ею белков. Эти белки – продукт «поломок» в генетическом материале нормальной клетки, превратившие ее в раковую. Наличие их – признак того, что ген или гены, вызывающий перерождение нормальной клетки, начал свою
  9. Вакцина на основе дендритных клеток для поиска и уничтожения раковых клеток
    Даже солидный рак с размера узелка 2 мм или даже 1 мм в ткани для пациента уже является болезнью всего организма. Так как каждая его клетка – это клетка-организм, то для излечения от рака необходимо уничтожение всех раковых клеток. Но прежде надо найти каждую раковую клетку в организме среди нормальных клеток. Этого можно добиться с помощью вакцины. Рак – не одно целое, а незримое
  10. Нарушения в передаче сигнала к делению в раковой клетке: но- вые мишени для уничтожения раковых клеток
    Стандартные лекарства против раковых клеток действуют на них через повреждения их ДНК. Но при этом такое же действие их и на здоровые клетки организма пациента. То есть эти лекарства неизбирательные, с тяжелыми побочными эффектами. Для избежания этого, ученые долго искали новые мишени для лекарств, чтобы уничтожать только раковые клетки. Их нашли в «участниках» передачи сигнала к делению в
  11. Клеточный цикл. Молекулы-регуляторы клеточного цикла открывают пути к диагностике и уничтожению раковых клеток
    В организме взрослого человека 5•1013 (В.Н.Сойфер, 1998) или 5•1014 (В.Тарантул, 2003) клеток. Каждая клетка любого типа – это часть своей ткани и организма в целом. Раковая клетка в организме человека – это уже не часть ткани и своего организма, а самостоятельная клетка, отделившаяся от них. Это клетка- организм. Деление клетки – это основное свойство и признак того, что она
  12. Индукция реверсии раковых клеток в нормальные – путь их ликвидации
    Термин «реверсия» (от лат. reversio – возврат). Этим термином обозначают: - возврат свойств раковой клетки к норме или возврат ее к нормальной клетке; - утрата раковой клеткой злокачественности; - созревание раковой клетки до нормально дифференцированной клетки и другое (И.Н. Швембергер, 1976, 1980). До сих пор причиной канцерогенеза считали изменения структуры генов и аберрации
  13. Вакцины – основное средство поиска и уничтожения раковых клеток
    Рак – не одно целое, а расселяющиеся по всему организму пациента потомки раковой клетки-организма с образованием метастазов. Это причины того, что для уничтожения раковых клеток необходим иммунный вариант лечения, т.е. системное воздействие. Раковая клетка несет на своей наружной мембране антигены, по которым ее может распознавать иммунная система и уничтожать. Основным средством иммунного
  14. Метастазирование раковых клеток: молекулярные причины и пути предотвращения
    Другим, еще более опасным следствием свойства инвазии раковых ство- ловых клеток, является образование ими метастазов в различных органах пациента. Метастаз – это вторичный очаг рака, образующийся из-за метастазирования раковых клеток в отдаленные органы. Метастазирование (от греч. metastasis – перемещение) – процесс переноса раковых клеток по кровеносным и лимфатическим сосудам из
Медицинский портал "MedguideBook" © 2014-2019
info@medicine-guidebook.com