<< Предыдушая Следующая >>

Канцерогенез из стволовой клетки ткани: молекулярные причины

Термин «канцерогенез» (от лат. ?carcinus? – краб и ?genere? – создавать) означает процесс превращения нормальной клетки в раковую клетку. Из нее путем деления, т.е. «из самой себя», образуется потомство дочерних клеток, т.е. рак.

В настоящее время термин «рак» ограничен теми опухолями, которые возникают из эпителиальной раковой клетки, а все другие – из неэпителиальной клетки, обозначаются термином – «саркома».

Для понимания канцерогенеза необходимо знать его источник, т.е. какая клетка превращается в раковую клетку и молекулярные причины превращения клетки.

До сих пор считалось, что раковая клетка может возникнуть из незрелой клетки ткани, т.е. способной к делению.

Ю. Конгейм (J. Conheim, 1877) высказал гипотезу, что раковая клетка возникает из остатков в процессе эмбриогенеза человека эмбриональных клеток в тканях различных органов, но доказать не мог.

Акад. В.С. Репин (2001) пишет, что почти во всех тканях любого органа человека имеются эмбриональные стволовые клетки в виде «вкраплений». Такие клетки называют региональными стволовыми клетками.

Стволовая клетка – это недифференцированная клетка и имеет необычные свойства:

- высокая способность к самообновлению или самоподдержанию;

- продолжительный период жизни, но способность к делению все же ограничена;

- низкая скорость деления и продолжительность цикла деления;

- обычно делится асимметрично: одна дочерняя клетка – остается стволовой клеткой, другая – дифференцированная клетка для замены погибших клеток данной ткани;

- стволовые клетки в тканях живут не сами по себе, а в специальной микросреде или нише из регуляторных клеток и обычно закреплены в ней молекулами адгезии;

- ниша необходима стволовым клеткам для выживания и сохранения свойства «стволовости».

Внутри ниши передаются молекулы-сигналы от клеток стромы ниши к стволовым и их дочерним клеткам, остающимся в нише. Эти сигналы блокируют активность определенных генов в дочерних клетках и активируют в других, выходящих из зоны влияния микросреды.

Еще мало знаний о клетках, образующих ниши, и как они создают возможности для нормальных стволовых клеток выполнять их функции. Очень мало известно о нишах раковых стволовых клеток.

Проблемы в нишах могут вести к болезням. Есть мнение, что из-за отсутствия молекул адгезии стволовая клетка ниши может отделяться и превращаться в раковую клетку, а образование ниш в тканях различных органов – место для метастазов раковых стволовых клеток.

Деление стволовой клетки в тканях организма – это регулируемый генами процесс.

Каждая клетка рака – это клетка-организм. До сих пор считалось, что клетки рака имеют одинаковые свойства. Поэтому цель излечения от рака – уничтожение всех его клеток.

В 50-60-х гг. ХХ в. начали появляться данные о том, что источником канцерогенеза является стволовая клетка ткани (Pierce G.B., Wallace C., 1971; Pierce G.B., 1972).

Исследования стволовых клеток во многом помогло исследованию канцерогенеза, были выявлены молекулярные причины свойств нормальных стволовых клеток и их потомков.

Оказалось, что асимметричное деление имеется и в раковой клетке любого типа. Это в пользу того, что раковая клетка – это стволовая клетка.

Уже в начале 1980-х гг. были получены данные, что клетки одного и того же рака различаются по способности давать начало раку.

Джон Дик (Dick J. E., 1997) и его группа из университета Торонто провели опыты на мышах. Они инфицировали мышей кровью больных лейкозом. Однако раком заболели лишь несколько животных, т.е. не все лейкозные клетки способны быть причиной болезни в новом организме. Из этого ученые сделали вывод, что при лейкозе в организме имеется множество клеток, но лишь некоторые из них являются раковыми стволовыми клетками.

Они изолировали и описали эти клетки – их белки-антигены, по которым их можно идентифицировать.

При лейкозе среди клеток имеется множество «выродившихся», но все же дифференцированных клеток, которые непрерывно делятся, создавая основную массу клеток рака. Среди этих «работниц» имеется несколько «королев» – раковых стволовых клеток. Именно они – причины рака, из них в процессе деления образуются как дифференцированные клетки с коротким сроком жизни, так и раковые стволовые бессмертные клетки. При этом дифференцированные клетки при прививке их мышам – не вызывали рак, а стволовые клетки – вызывали образование рака, т.е. они раковые стволовые клетки.

Как видно, разница в способности клеток рака при прививке животным вызвана раковой стволовой клеткой за счет ее асимметричного деления. Количество раковых стволовых клеток при разном типе рака варьирует: например, среди тысячи клеток рака может быть лишь одна раковая стволовая клетка.

Последующие эксперименты других ученых позволяют предположить, что раковые стволовые клетки являются причиной, если не всех типов раковой клетки, то многих.

Приведенные наблюдения привели к разработке канцерогенеза из стволовой клетки данного типа – рака крови, а затем его обнаружили в некоторых типах клеток солидного рака.

М. Кларк (M. Clarke, 2003) и его группа из лаборатории Мичиганского университета сообщили первые данные о наличии раковых стволовых клеток в солидном раке молочной железы.

Ученые начали с того, что пересадили самкам мышей с ослабленной иммунной системой клетки рака из опухоли, взятые у 9-ти пациенток с раком молочной железы. В итоге у всех мышей развились аналогичные опухоли.

Затем ученые приготовили из раковых клеток суспензию и снова ввели ее мышам. В суспензии содержались все типы клеток, обнаруженные в опухолях. Мыши заражались каждый раз, когда им вводили 5000 или более клеток. Когда же количество клеток было сокращено до 1000, рак возникал только у четверти из подопытных мышей. М. Кларк сделал вывод, что при уменьшенной дозе инъекции количества клеток-возбудителей рака не хватает для возникновения рака.

Чтобы выявить клетки, вызывающие рак, ученые рассортировали различные типы клеток, используя моноклональные антитела, которые связаны с различными типами белков на поверхности клеток. И делали мышам инъекции. Оказалось, что многие типы клеток вообще не вызывают рак. Но рак постоянно возникал под воздействием всего лишь 200 клеток, характерным признаком которых были способность вырабатывать на поверхности белки CD44 и ESA – эмбриональные белки-антигены, а так же недостаток белка CD24.

«Небольшое количество клеток этого типа способно дать толчок для образования рака, соизмеримый с воздействием 50000 несортированных клеток», – сказал М. Кларк.

Раки, вызванные этими редкими клетками, содержат полный набор клеток, присущий ткани, в которой возник рак. В их числе и те, которые не способны вызвать образование нового рака. Значит, можно предположить, что, как и стволовые, клетки могут образовывать различные типы клеток.

Клетки-возбудители сходны с эпителиальными стволовыми клетками, которые также имеют на своей поверхности белки CD44 и ESA. «Это имеет огромное значение с точки зрения практического лечения, – подчеркивает М. Кларк. – У нас есть надежда разработать способы борьбы с ними».

Таким образом, в образованных этими двумя сотнями клеток раках, присутствовали все типы раковых клеток. Это означает, что те 200 клеток-убийц действуют примерно так же, как и стволовые клетки здорового организма, способные создавать ткани любых типов. По словам проф. М. Кларка, по своим признакам они напоминали эпителиальные стволовые клетки.

Джеймс Троско (J.E. Trosco, 2005) из Мичиганского университета пишет, что раковая клетка может возникать из двух источников: 1) из стволовой клетки ткани и 2) из любой специализированной, т.е. дифференцированной клетки ткани. Проблема второго источника в том, что для того, чтобы дифференцированная клетка стала раковой, она должна сначала вернуться в «стволовое» состояние.

Ген oct-4 является геном-регулятором, т.е. через свой белок Oct-4 выполняет контроль экспрессии других генов для поддержания «стволовости» стволовой клетки ткани. В нормальной соматической клетке ткани у взрослого человека этот ген выключен.

Ученые во главе Джеймс Троско открыли, что экспрессия этого гена во взрослой стволовой клетке превращает ее в раковую клетку. Клетка, в которой не было экспрессии этого гена, не могла снова стать взрослой стволовой клеткой и трансформироваться в раковую клетку. Теперь ген oct-4 и его белок Oct-4 являются маркерами для идентификации раковой стволовой клетки.

Авторы видят применение своего открытия так: «зная, как остановить экспрессию этого гена в раковой стволовой клетке или даже в ее клетке- предшественнице, мы можем добиться потрясающих результатов в лечении и даже предотвращении возникновения раковой клетки».

Использование гена oct-4 и его белка Oct-4 в качестве мишеней для новых химических агентов и других препаратов «может быть крайне полезным против рака». «Это особенно важно в свете открытий того, что среди миллиардов нера ковых клеток есть несколько стволовых раковых клеток, и именно они не поддаются лечению против рака», – сказал Джеймс Троско. Другими словами, существующие методы лечения рака направлены не на те раковые клетки.

То есть мишенью для лекарств и других средств должны быть только раковые стволовые клетки, а дефектные нераковые клетки в опухоли, составляющие основную массу клеток, как неопасные и с конечным сроком жизни, будут погибать сами собой через апоптоз.

Так в раке молочной железы был доказан канцерогенез из стволовой клетки, как и в раке крови. Вскоре были получены такие же данные в других типах солидного рака – рак нервной ткани, мозга, предстательной железы, меланома.

М. Кларк и М. Бекер (M.F. Clarke, M.W. Becker, 2006) пишут, что раковые стволовые клетки, по-видимому, «появляются в результате сбоя в регуляторной системе поврежденных стволовых клеток или их прямых потомков».

Внешние сигналы из клеток ниш держат под контролем, как нормальные стволовые клетки, так и раковые стволовые клетки.

1. Если культивировать нормальные стволовые клетки в среде, где отсутствуют сигналы, сдерживающие их специализацию, то «они очень быстро пролиферируют и дифференцируются».

2. Если раковые стволовые клетки трансплантируют в новую нишу, «они не инициируют образование рака».

Эти опыты демонстрирует, насколько важно для стволовых клеток их микроокружение, т.е.
ниша без которого они не могут сохранять свои «стволовые» свойства.

Исходя из этого, некоторые ученые предполагают, что ниша может быть мишенью для воздействия лекарствами на раковые стволовые клетки. Ниши могут стать «ведущим путем к новой терапии, ограничивающей потенциал раковых клеток».

Итак, гипотеза канцерогенеза Ю. Конгейма (1877) проверена учеными лишь теперь и подтверждена: стволовая клетка ткани – истинный источник канцерогенеза. Теперь остается выяснить молекулярные причины канцерогенеза.

Р. Холлидей (R. Holliday, 1979) обнаружил, что «несмотря на существование множества канцерогенов и мутагенов, нет прямого доказательства, что фенотип раковой клетки является результатом мутаций». В опытах по трансплантации он доказал, что причиной превращения нормальной клетки в раковую клетку являются эпигенетические изменения в ее генах.

Автор разработал концепцию канцерогенеза на основе метилирования и деметилирования промотора генов, создающих все свойства раковой клетки. Это истинные, за редким исключением, причины всех свойств раковой клетки и их обозначают терминами: «эпигенетические изменения» или «эпимутации».

«Эпи» в слове «эпимутация» от латинского «над», означает, что при этом структура последовательности оснований гена не затрагивается.

При мутации гена изменяется его структура, что в принципе является необратимым процессом. В таком случае реверсия, т.е. возврат свойств раковой клетки к нормальным свойствам клетки, невозможна.

При эпимутации присоединение метильной группы -СН3 к промотору гена выключает ген, – репрессия, при удалении метильной группы -СН3, ген включается, – дерепрессия. При этом реверсия свойств раковой клетки возможна (В.Л. Карпов, 2003).

А.С. Браун (1965) подтвердил концепцию эпимутации на раковых клетках растений и раковых клетках животных.

Для канцерогенеза необходимы: дерепрессия «молчащих» в нормальной клетке генов и одновременно репрессия в ней генов-супрессоров. Первый тип генов – это гены фетальных белков, создающие все свойства раковой клетки. Второй тип генов – это гены, которые своим продуктом – белками препятствуют возникновению раковой клетки.

Переключение генов осуществляется присоединением метильной группы:

-СН3 к цитозину – одному из четырех оснований. ДНК; местами метилирования являются дуплеты цитозин – гуанин.

В «работе» гена следует различать: саму «работу» – это транскрипция иРНК на одной из цепей ДНК, и проявление этой работы – экспрессию гена. Она выражается в трансляции, т.е. синтезе белка в рибосомах.

При метилировании дуплета CpG (цитозин – гуанин) ген будет инактивирован, т.е. репрессирован. Причины: метильные группы препятствуют связыванию фактора транскрипции с промотором гена или присоединяется белок- репрессор к нему.

Присоединение метильных групп к промотору гена осуществляет фермент метилтрансфераза, а удаляет их другой фермент – деметилаза. Это определяет судьбу гена: быть ему включенным или выключенным в клетке.

Модификация промотора гена метильной группой сохраняется при делении клетки и передается ее дочерним клеткам.

В канцерогенезе за счет эпимутации участвует ряд генов, ниже мы кратко характеризуем некоторые из таких генов по материалам статьи А.В. Лихтенштейн, Н.П. Киселевой (2001) и работ других авторов.

1. Ген метилтрансферазы 1. Повышенная экспрессия этого гена ведет к избытку его продукта, что вызывает канцерогенез. Ген и его фермент – маркеры раковой клетки.

2. Ген wnt и его белок Wnt. Этот белок блокирует синтез веществ, которые связывают стволовую клетку с клетками ее ниши в ткани. Дело в том, что адгезия к другим клеткам – необходимое условие для асимметричного деления стволовой клетки.

Исследователи считают, что именно нарушение адгезии и как следствие неспособность адекватно взаимодействовать с клетками ниши может вести к раковому перерождению стволовой клетки.

3. Ген E-cadherin и его белок-рецептор в мембране клетки. Они сохраняют межклеточные контакты. Эти белки-рецепторы регулируют деление и миграцию клеток, а их потеря или нарушение функции связаны со способностью ра ковой клетки к инвазии и метастазированию.

Связь кадгерина с раковой клеткой носит причинный характер: когда восстанавливается образование кадгерина, деление раковой клетки прекращается, ее фенотип нормализуется. Отсюда: увеличение уровня экспрессии E-кадгерина должно предотвращать инвазию раковых клеток и вернет их в нормальное состояние.

Репрессия гена имеется в разных типах раковой клетки за счет метилирования CpG-островков в его промоторе (M. Takeichi, 1993; W. Birchmeier, J.Behrens, 1994; A.K. Perl et al., 1998).

4. Ген-супрессор wt53. Это «хранитель генома» от дефектов генов в клетке. В «теле» гена имеются отдельные метилированные CpG- динуклеотиды, за счет которых могут возникать мутации заменой пары G – C на А – Т.

5. Ген Hic-1. Это ген-супрессор, продукт его – белок транскрипции. Эпигенетические изменения его за счет метилирования CpG-островков встречается в разных типах раковой клетки.

6. Ген WWOX. Это ген-супрессор, уничтожающий клетки с дефектами в геноме. Открыт в 2005 г. проф. Kay Huebner в университете Огайо. Ген выключается метилированием его промотора в раковых клетках разного типа. Восстановление даже его одного «вызывает цепную реакцию апоптоза раковых клеток. Именно торможение активности WWOX метилированием считается важнейшей причиной возникновения раковой клетки разного типа». «Для восстановления функций выключенного гена WWOX необходимо создать деметилирующее лекарство, над этим и работают сейчас ученые».

7. Ген Ink4a играет ключевую роль в защите организма человека от раковых клеток. Его белок – p16-Ink4a препятствует старым стволовым клеткам воспроизводить себя, когда они накопили много генетических дефектов и много белка. При отсутствии этого гена стволовые клетки обретают исключительную способность к размножению и превращаются в раковые клетки, – доказано учеными.

8. Ген-супрессор PTEN – управляет ферментом, стимулирующим деление клеток, и отвечает также за деление и выживание стволовых клеток. Он подавляет раковые клетки всех типов, но в них «отсутствует или выключен».

Итак, мы знаем истинную причину рака – раковую стволовую клетку, ее свойства и их молекулярные причины. Из этого вытекают важные следствия.

В диагностике рака – выявлять только раковую стволовую клетку и ее потомки по генам-маркерам и белкам-маркерам ее свойств.

В излечении рака – достаточно уничтожить только раковые стволовые клетки, а остальные – нераковые клетки рака, погибнут сами собой через апоптоз. Но, если в процессе лечения пациента останется где-то даже одна раковая стволовая клетка, то рецидива рака в этом месте «не избежать».

Раковая стволовая клетка возникает в результате эпигенетических изменений в клетке. Поэтому ее можно не только уничтожать, но и подвергать реверсии. Но это лишь начинает «входить» в клиническую практику.

Как видно, знания того, что раковая клетка – это стволовая клетка, дает онкологу принципиально новые возможности не только в диагностике раковых клеток, но и в излечении от рака.

R.K. Busch (1976) отмечал, что канцерогенез начинается вследствие дерепрессии фетальных генов, детерминирующих деление и инвазию эмбриональной клетки. «Отсутствие ингибиторов этих генов, продуцируемых только эмбриональными клетками», создает болезнь – рак.

Я.Г. Эренпрейс (1982) подчеркивал, что раковая клетка – «это эмбриональная клетка, лишенная возможности участия в нормальном эмбриогенезе».

Так как эмбриональные свойства в организме взрослого передаются не эмбриональным клеткам, «последние лишены возможности участия в эмбриогенезе, то эмбриональные свойства манифестируются как рак». Из-за несоответствия между эмбриональными свойствами клеток и неэмбриональными условиями их существования, делает клетки раковыми.

Из этого автор делает для онкологов вывод, что «устранение этого несоответствия, например, путем введения раковых клеток в эмбрион, лишает клеток злокачественного фенотипа». Но из этого напрашивается другой важный для клинической практики вывод: введение в организм, страдающего от рака, эмбриональных клеток, так же должно лишать раковые клетки злокачественного фенотипа.

Теперь оба пути ликвидации раковых клеток подтверждены, как в экспериментах на животных, так и частично в клинической практике. Широкое внедрение этого метода в клиническую практику для излечения пациента от рака – вопрос только времени. Это естественный и верный подход не только для излечения уже рака, при том любого типа, но и для предотвращения рака, когда регистрируется у пациента явная угроза его.

Первые сообщения о попытках лечения от рака эмбриональными субстанциями – гомогенаты и экстракты из эмбриональных тканей появились в 30- х годах ХХ века.

Fichera G. (1932) и др. заметили, как от введения пациентам, страдающих от рака, гомогенатов эмбриональных органов замедлялся рост рака и в некоторых случаях его рассасывание. Когда же они применили экстракты из тканей этих органов, «увидели, что действие экстрактов не менее эффективно».

По мнению ученых, такой эффект лечения рака вызывают «факторы», которые вырабатываются тканями эмбриона и плацентой. Уже в то время делались попытки использования эмбриональных экстрактов в качестве вакцин. Тогда впервые было показано, что введение крысам эмбриональной ткани за 2-3 недели до прививки им саркомы Иенсена, приводит к отторжению раковых клеток.

В настоящее время во многих странах мира для лечения рака делаются попытки применения препаратов из эмбриональных тканей. Для приготовления препаратов берется материал от абортов человека и из плаценты. Выделяют так же отдельные белки альфа-фетопротеин и другие для изготовления лекарств, препаратов для диагностики.

Проф. Джон Итон (J. Eaton, 2006) и его группа из США уже протестиро вали на мышах два типа вакцин, приготовленных из эмбриональных стволовых клеток, полученных из мышиных бластоцист. Ученые показали, что вакцинация эмбриональными стволовыми клетками предотвращает возникновение рака легких у животных, которым вводят клетки рака легких или воздействуют канцерогенными веществами. Материалы исследований ими доложены на международном онкологическом симпозиуме в Праге (2006).
<< Предыдушая Следующая >>
= Перейти к содержанию учебника =

Канцерогенез из стволовой клетки ткани: молекулярные причины

  1. Бессмертие раковой соматической клетки: молекулярные причины
    В организме человека есть некоторые типы клеток, которые преодолева ют недорепликацию ДНК перед делением и поэтому способны размножаться бесконечно, т.е. становятся бессмертными. К таким клеткам относятся: половые и стволовые клетки, лимфоциты, делящиеся во время иммунного ответа, и опухолевые клетки, в том числе, раковые клетки. В 1971 г. наш ученый – проф. А.М. Оловников предсказывал, что
  2. Смертность нормальной соматической клетки: молекулярные причины
    В 1891 г. известный биолог А. Вейсманн (A. Wesmann) впервые предпо- ложил, что соматические клетки животных и человека «должны иметь ограни- ченный потенциал деления», т.е. они смертны. Но ученый не дал подтвержде- ний этому предположению. Знания о том, что соматическая клетка того или иного типа у человека смертна или бессмертна очень важно для понимания раковой клетки. Для решения вопроса
  3. Молекулярные основы канцерогенеза.
    Рассматривая различные теории развития опухолей, поражаешься тому факту, что разнообразные канцерогенные агенты, отличающиеся по механизмам своего действия, приводят к одному и тому же результату — развитию опухолей. Объяснение этому феномену было дано лишь в последние десятилетия, когда рак стал рассматриваться как генетическое заболевание. Генетические перестройки могут происходить под
  4. Стволовые клетки – естественное средство поиска и уничтожения раковых клеток
    При раке его клетки способны проникать в окружающие здоровые ткани и распространяться по различным органам, где создают новые очаги рака – ме- тастазы. Если рак возникает из одной раковой стволовой клетки, то излечение его немыслимо без уничтожения всех его раковых стволовых клеток- потомков в организме пациента. Для уничтожения каждой раковой клетки прежде требуется ее найти среди
  5. Опухоли: определение, номенклатура, классификация. Опухолевый рост и молекулярные основы канцерогенеза. Опухоли из эпителия.
    1. Основные теории опухолевого роста 1. воспалительная 2. дизонтогенетическая 3. вирусно-генетическая 4. химических канцерогенов 5. физических канцерогенов 2. Механизмы активации клеточных онкогенов 1. альтерация 2. регенерация 3. пролиферация 4. амплификация 5. точковая мутация 3. Стадии химического канцерогенеза 1. промоция 2. инициация 3. альтерация 4. пролиферация 5. прогрессия опухоли 4.
  6. Метастазирование раковых клеток: молекулярные причины и пути предотвращения
    Другим, еще более опасным следствием свойства инвазии раковых ство- ловых клеток, является образование ими метастазов в различных органах пациента. Метастаз – это вторичный очаг рака, образующийся из-за метастазирования раковых клеток в отдаленные органы. Метастазирование (от греч. metastasis – перемещение) – процесс переноса раковых клеток по кровеносным и лимфатическим сосудам из
  7. КЛЕТКИ И ТКАНИ
    КЛЕТКИ И
  8. Инвазия раковых клеток: молекулярные причины и пути пре- дотвращения
    В истории первым методом лечения рака было хирургическое иссечение, хотя в I в. н.э. делались попытки лечения рака лекарствами (W.R. Belt, 1957). Уже тогда хирурги столкнулись с трудностями иссечения рака: очень часто возникал в области иссечения «возврат», т.е. рецидив рака, и крайне редко – «местное» излечение. Это заставило хирургов разрабатывать принципы операций при раке. Ибн
  9. ТКАНИ ВНУТРЕННЕЙ СРЕДЫ, ИЛИ ОПОРНО-ТРОФИЧЕСКИЕ ТКАНИ
    Онтогенетически опорно-трофические ткани у млекопитающих появляются очень рано в виде мезенхимы, которая дает начало всем опорно-трофическим тканям взрослого организма. Мезенхима существует только на ранней стадии эмбрионального развития. У эмбриона она заполняет все промежутки между зародышевыми листками, хордой и нервной трубкой. Образуется она путем выселения клеток главным образом из
  10. Протеом клетки – значение для медицины, ранней диагностики раковой клетки и излечения рака
    Скоро нынешняя медицина уйдет в прошлое. Давняя мечта П. Эрлиха – иметь лекарство без нанесения вреда пациенту – «волшебную пулю», станет реальностью. Оно будет уничтожать: при инфекциях – возбудителей, при раке – раковую стволовую клетку, не повреждая здоровых клеток, действуя на белок, вызывающий болезнь. Для каждого пациента будут создаваться индивидуальные лекарства. Это началось после
  11. Проводниковая (стволовая) и плексусная анестезия
    Проводниковой называют метод регионарной анестезии, предусматривающий подведение раствора местного анестетика непосредственно к нервному стволу. Плексусная анестезия осуществляется путем воздействия на сплетения нервных стволов до их разветвления. Возрождение интереса и перспективы развития проводниковой и плексусной анестезии связаны с появлением нового поколения местных анестетиков и других
Медицинский портал "MedguideBook" © 2014-2019
info@medicine-guidebook.com